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分子实验室如何选择核酸提取仪?

更新时间  2022-06 阅读 93

随着分子生物学技术的快速发展,以核酸杂交、核酸扩增和核酸序列分析为代表的分子诊断和检测技术的重要作用日益突出。样品预处理占整个分析过程的60%,90%的检测误差发生在预处理环节。核酸提取是分子诊断实验的“第一步”,也是最关键的一步。获得的核酸质量直接影响下游分子生物学实验的成败。

核酸提取仪

国内二级医院、三级医院、疾病预防控制中心、第三方检测等符合国家新冠肺炎检测要求的机构将继续接收大量新冠肺炎检测需求。与此同时,很多省份都出台了政策文件,在全省范围内扩建医院,尤其是二级医院。面对市场上各种各样的产品,如何选择一台合适的自动核酸提取机需要仔细分析。


1.核酸提取原则


1.1


使用离心柱法的仪器


离心柱法核酸提取 instrument主要采用离心机和自动移液装置相结合的方法。通量一般为1-12个样本,操作时间与人工提取相差无几,无法提高实际工作效率。而且价格昂贵,不同类型仪器的耗材不能通用,只适合资金充足的大型实验室。


1.2


带有磁珠法的仪器


以磁珠为载体,基于磁珠在高盐低PH值下吸附核酸,在低盐高PH值下与核酸分离的原理,通过移动磁珠或转移液体即可实现核酸提取纯化的全过程。由于其原理的独特性,可设计成多种通量,单管或8-96个样品即可提取,操作简单快捷。一个批次的提取时间为9-40min(不同厂家的样品不同),大大提高了实验效率,成本低,可以在不同的实验室使用。是目前市场上的主流仪器。


磁珠法自动核酸提取仪器分为磁棒法和吸引法。


1.2.1


抽吸法


顾名思义,吸样是通过自动移液装置进行的。磁铁分为底部和侧面两种装置。抽吸法的问题是,为了在不去除磁珠的情况下去除废液,移液管不能离磁珠太近,以防磁珠随废液一起被去除。1)底部带有磁铁的装置,由于磁珠被磁铁吸附在底部,使得漂洗液无法完全去除,残留的漂洗液中的盐和乙醇会影响后续的洗脱效率和PCR成功率;2)侧面有磁铁的装置会有较少的残液,但洗脱效率也不好。要靠DNA自己溶解到洗脱缓冲液中,除非超过半小时,所以有的96自动核酸提取工作站提取一轮需要150分钟,32磁棒法同样时间可以提取五轮。


1.2.2


磁棒法核酸提取仪器


通常,有8、16、32和96个通量通道。磁棒只是带走磁珠,转移到下一步对应的反应孔中。此外,磁棒法提取仪器应具有更完善的功能,如加热,每个加热罐应具有独立的温度控制,以便设置不同的加热、裂解和洗脱温度。还有一点很重要,驱动磁棒的电机要能带动磁棒快速混合搅拌液体。


磁棒法核酸提取米混合法


1)摇动混合:通过磁棒的上下振动来混合磁珠和核酸是目前市场上的主流方法。


2)旋转混合:通过磁棒的旋转来混合磁珠和核酸。与传统的振荡混合技术相比,气溶胶产量大大减少了50%以上。交叉污染带来的假阳性风险得到更有效的控制,进一步保证了实验结果的准确性。此外,旋转混合法可以限度地保留DNA的长链,减少核酸的机械断裂,提高后续检测的灵敏度。


核酸提取试剂盒试剂及其操作步骤


买了仪器后,一定要考虑配套试剂的后续使用问题:


1)配套试剂是否齐全。不同样品类型提取套件的产品链是否完整?


2)配套试剂是否预包装。无包装试剂需要实验室工作人员用移液器添加裂解液、洗涤液、洗脱液等试剂,不减少人工操作时间;


3)除了在提取前加入样品。需要加蛋白酶K吗?因为有些公司还没有掌握将蛋白酶K预包装在裂解液中并在室温下保存的技术,蛋白酶K需要在-20℃下单独保存,所以需要立即添加。每个样品多加一步蛋白酶K,K,96个样品的作用时间增加约10~15min。


4)匹配试剂的保存温度。有些厂家的提取试剂需要在2-8℃下运输和储存。冷链运输增加了运输成本,储存需要在冰箱里。然而,预包装的提取试剂具有较大的体积,并且当像新冠肺炎那样大量使用时,冰箱中没有足够的存储空间来存放一段时间的试剂。


5)提取后的扩增效率。提取核酸时,观察磁珠残留率,检查提取核酸的质量!


深孔板



仪器使用的便利性


应该考虑使用仪器的方便性。中文界面有利于学习如何使用仪器和编辑程序,减少新操作人员的误操作和实验失败的风险。


公司售后服务体系


作为医疗器械,简单的实验关系到诊断,甚至关系到成千上万人的生命安全。仪器厂商的售后团队是购买仪器时要考虑的软实力,强大、经验丰富的售后支持团队是购买仪器的重要后盾。售后团队需要做的是:


1)负责处理训练实验中的常见问题和简单故障;


2)负责培训设备的日常维护;


3)提供临床常见PCR检测项目的技术数据;


4)安排技术人员对全院医务人员进行集中科普讲座;


5)接到服务电话后2小时内响应,形成解决方案,技术支持人员及时上门解决;