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核酸提取解决方案的操作与运用技巧

更新时间  2022-03 阅读 255

对于大多数生物研究人员来说,细胞培养、细菌培养、提取核酸等。都是实验室,实验操作费时费力,过程中可能会遇到各种坑。今天我们要讲的是如何让你的核酸 extraction不再烦恼!


博科核酸提取仪


核酸分为脱氧核糖核酸( DNA)和核糖核酸( RNA)。它是由许多核苷酸单体聚合而成的生物大分子化合物,是生命最基本的物质之一。分别提取核酸 is DNA extraction和RNA extraction。两种方法的提取原理大致相同。简单来说就是分两步:细胞或组织裂解和核酸 纯化。

核酸 extraction 纯化常用的方法有酚/氯(lü)仿萃取法、离心柱法、磁珠法等。


1、酚/氯(lü)仿萃取法

B (xi)烯丙基氯(lü) DNA的仿提取是用苯酚作为蛋白质变性剂,反复提取,使蛋白质变性,用SDS(十二烷基磺酸钠)裂解细胞膜,在蛋白酶K和EDTA存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子,使核蛋白变性降解,使DNA不含核蛋白。


苯酚/氯(lü)模拟萃取法的优点是成本低,对实验条件要求低。这种方法的缺点也很明显:由于使用了苯(芬)酚、氯(吕)仿等有机试剂,毒性较高,长期操作对人员健康影响较大;而且核酸的回收率低,损耗大。


离心柱纯化

以DNA萃取离心柱为例。离心柱结构主要是一种特殊的硅基质吸附材料,可以特异性吸附DNA,而RNA和蛋白质会通过。该方法可选择性吸附核酸,而不吸附蛋白质和盐,从而实现核酸与蛋白质和盐的分离,是目前试剂盒提取广泛采用的方法。


该方法受人为操作因素影响较小,提取的DNA纯度稳定性很高。此外,离心柱法提取的DNA纯度高于传统酚氯(lü)模拟法提取的DNA纯度。离心柱法以其低廉的价格和相对方便的操作,逐渐取代了传统的DNA萃取法,被高校、科研院所等市场普遍接受。


这种方法的缺点是需要的样本较多,但不适合稀有样本。当样品过量时,需要反复离心,样品提取效率低,不便于高通量和自动化操作。这与现代生物实验,特别是基因诊断、疾病检测和转基因检测领域的高通量和自动化的要求不相适应。离心柱法DNA萃取需要大量的操作人员和仪器。当面对突发疫情时,更需要有高通量DNA提取设备和方法,更有效、更准确地监测和控制疫情。


磁珠法

磁珠法是一种分离纯化固体载体(SPRI)的可逆固定化方法。主要原理是:在不同浓度的PEG(聚乙二醇;;聚乙二醇)、不同片段大小的DNA会吸附在磁珠的羧基修饰层上,这些DNA可再次溶于水洗脱回收。


实验中使用的磁珠分为五层,从里到外依次为:核为聚苯(xi)烯材料、超顺磁材料(主要是四氧化三铁)、第二层聚苯(xi)烯材料、第二层超顺磁材料和表面粗糙的羧基修饰层。粗糙的表面更有利于核酸与羧基改性层的结合。该方法是将纯化介质包覆在纳米级磁珠表面,DNA被介质吸附,DNA附着在磁珠上,在外磁场的作用下定向移动,使核酸与其他物质分离。


与其他集中式方法相比,磁珠法具有无可比拟的优势,包括:

(1)提取灵敏度高,只需少量样品即可提取核酸;

(2 )/ kloc-6/纯度高,磁珠与核酸的特定组合能使核酸与杂质充分分离,使得提取的核酸纯度高、浓度高;

(3)可以实现自动化和批量操作,通过机器自动化完成操作,人力较少,同时可以完成多个样品的批量操作。以32孔核酸自动提取器为例,一个样本的提取时间最多可用于处理32个样本,满足了生物学高通量运行的要求,能够在传染病爆发时快速及时地做出反应。

(4)操作简单,时间短。整个提取过程只有四步。根据仪器不同,部分仪器提取时间可缩短至30分钟,大大提高了实验效率。

(5)安全无毒,不使用传统方法中的苯、氯(lü)仿等有毒试剂,*大限度减少对实验操作人员的伤害,完全符合现代环保理念;




近年来,磁珠法已经成为核酸提取的必备工具之一,成为核酸自动提取设备的必备部件之一。Automatic 核酸 extractor对于经常用大量实验样本做实验的实验人员来说是个不错的选择。而且对于各种核酸,无论是质粒DNA,基因组DNA,还是RNA,一个自动化的核酸提取器就可以满足实验者的提取要求。


目前全自动核酸提取器基本可以满足核酸的大批量提取的需要,针对不同的样本(如全血、质粒、培养细胞、组织等。)和核酸 types(基因组DNARNA/)